国家三类新兽药—黄芪多糖口服液抗鸡传染性法氏囊病的临床试验

作者：  来源：  时间：2009-6-29 12:03:10  阅读：138次

摘要 目的：考察黄芪多糖口服液对 SPF 鸡感染传染性法氏囊病病毒的抑制效果。方法：以 IBDV 强毒株 BC-6/85 人工感染 28 日龄 SPF 鸡，于攻毒前后在其饮水中加入不同剂量的黄芪多糖口服液，观察试验鸡的临床症状、病理变化、病变发生率等。结果： 0.67 ‰（ V/V ）的黄芪多糖口服液通过饮水给药，对 IBDV 强毒株 BC-6/85 攻击具有保护作用，其可极显著提高其法氏囊指数和胸腺指数，可用于传染性法氏囊病的预防。 0.33 ‰（ V/V ）、 0.67 ‰（ V/V ）、 1.33 ‰（ V/V ） 3 种不同浓度的黄芪多糖口服液经饮水给药，可有效抑制人工感染传染性法氏囊病。各给药组与攻毒对照组比较，均能显著提高其法氏囊指数，高、中剂量治疗组效果极显著，而中剂量治疗组与高剂量治疗组比较，无显著性差异。推荐黄芪多糖口服液防治鸡传染性法氏囊病的剂量为 0.67 ‰（ V/V ），以饮水给药，连续服用 5d 。

关键词 黄芪多糖口服液；人工感染；鸡传染性法氏囊病；抑制

鸡传染性法氏囊病（ IBD ）是由传染性法氏囊病病毒所引起的一种感染雏鸡和幼鸡的急性接触性传染病 [1 、 2] 。其基本特征 [3] 是对法氏囊内Ｂ淋巴细胞损伤，鸡体免疫能力受到抑制，鸡对其它传染病易感性增强，以及对其它禽类疫苗免疫应答能力下降，而造成养禽业极大的经济损失。近年来由于变异株和超强毒的不断出现 [4 、 5 、 6] ，免疫失败时有发生，给 IBD 的防制带来了极大的困难。

黄芪多糖口服液由中药黄芪提取加工制成，具有补气、固表、利尿的作用，且能诱导机体产生干扰素，促进抗体产生，增强吞噬细胞活性，调节机体免疫功能。对于动物病毒性传染病具有较好的治疗和预防作用。为了观察黄芪多糖口服液对 SPF 鸡感染传染性法氏囊病病毒的抑制效果，本试验采用 IBDV 强毒株 BC-6/85 人工感染 28 日龄 SPF 鸡致其发病，于攻毒前后在其饮水中加入不同剂量的黄芪多糖口服液，观察该药物对 SPF 鸡感染传染性法氏囊病病毒的抑制效果。

 

1 　材料与方法

1.1 材料

1.1.1 黄芪多糖口服液，由北京生泰尔集团爱迪森（北京）生物科技有限公司生产，批号： 070526 ；成分：黄芪；规格： 100ml/ 瓶。

1.1.2 鸡传染性法氏囊病病毒 IBDV 强毒株 BC-6/85 ，毒力为 10 -5 /0.1ml 3/3 法氏囊阳性，购自中国兽药监察所，冻干日期： 1997 年 6 月 25 日 。

1.1.3 试验动物 25 日龄 SPF 鸡，共 240 只，购自北京梅里亚维通实验动物技术有限公司。

1.1.4 饲料及饲养 SPF 鸡饲料，购自北京科澳协力饲料有限公司。试验鸡均饲养在标准鸡舍，自由采食与饮水。

1.2 方法

1.2.1 毒株处理 将 IBDV 强毒株 BC-6/85 按照菌种分发证书上的毒力用灭菌生理盐水稀释，以 1000BID （ BID: 法氏囊感染剂量）进行攻毒。

1.2.2 实验动物分组与处理

将供试鸡随机分为 6 组，每组 40 只。自由采食与饮水。分组与给药情况（见表 1 ）。

于攻毒 12h 后每组剖检 1 只鸡，共剖检 6 只，观察到有 2 只鸡出现法氏囊轻微发黄等病变，此时即开始给药。

表 1 攻毒和给药方案

序号	组别	25日龄	28日龄	攻毒后16h 给药
第一组	健康对照组		不攻毒	不喂任何药物，自由饮水
第二组	预防组	饮水给予黄芪多糖口服液，浓度为 0.67 ‰（ V/V ），连续服用 5d	每只鸡点眼 IBDV-BC6/85 株强毒液 0.05ml
第三组	高剂量治疗组		每只鸡点眼 IBDV-BC6/85 株强毒液 0.05ml	开始饮水给予黄芪多糖口服液，浓度为 1.33 ‰（ V/V ），连续服用 5d
第四组	中剂量治疗组		每只鸡点眼 IBDV-BC6/85 株强毒液 0.05ml	开始饮水给予黄芪多糖口服液，浓度为 0.67 ‰（ V/V ），连续服用 5d
第五组	低剂量治疗组		每只鸡点眼 IBDV-BC6/85 株强毒液 0.05ml	开始饮水给予黄芪多糖口服液，浓度为 0.33 ‰（ V/V ），连续服用 5d
第六组	攻毒对照组		每只鸡点眼 IBDV-BC6/85 株强毒液 0.05ml	不喂任何药物，自由饮水

注： 1.33 ‰（ V/V ）以 1ml 黄芪多糖口服液兑水 0.75kg ; 0.67 ‰（ V/V ）以 1ml 黄芪多糖口服液兑水 1.5kg ;

0.33 ‰（ V/V ）以 1ml 黄芪多糖口服液兑水 3.0kg

1.2.3 观察指标

攻毒后第 3d 将各组实验鸡每组取 5 只剖杀，分别采集法氏囊观察病理变化，计算病变发生率 [7 、 8] 。

攻毒后第 14d 将所有实验鸡称重、剖杀，观察病理变化，分别采集法氏囊观察病理变化，计算病变发生率；将采集的法氏囊、脾脏、胸腺称重，计算法氏囊等免疫器官指数。

2 　结果

2.1 发病情况、临床症状与病理变化

攻毒 3d 后，开始表现轻微临床症状。健康对照组，精神、饮食欲均正常；预防组，精神、饮食欲基本正常；高剂量组，有 1 只鸡精神沉郁、活动减少，饮食欲减损；中剂量组，精神、饮食欲均正常，无异常反应；低剂量组，有个别鸡粪便白色带血，精神、饮食欲基本正常；攻毒对照组，发现有相当一部分鸡粪呈白色、灰绿色或带血，有 1 只鸡死亡，死亡鸡剖检，法氏囊严重发黄、有胶冻样渗出物、剖开后内部呈豆腐渣样、有大量粘液和出血点（见表 2 、 3 ）。

 

表 2 攻毒后试验鸡临床表现

组别	精神	食欲	羽毛	动态	粪便	死亡
健康对照组	正常	正常	正常	正常	正常	无
预防组	正常	正常	正常	正常	正常	无
高剂量组	基本正常	正常	正常	正常	正常	无
中剂量组	正常	正常	正常	正常	正常	无
低剂量组	略沉郁	稍减损	正常	欠活泼	偶见稀便	无
攻毒对照组	略沉郁	减损	蓬松	呆立	灰绿带血	1

 

 

表 3 攻毒后第 3d 法氏囊眼观病理变化

	肿大	变黄	外部胶冻样渗出液	内部胶冻样渗出液	内部出血点	病变发生率
健康对照组						0/5
预防组	+			+	+	4/5
高剂量治疗组	+			+	+	5/5
中剂量治疗组	+			++	+	4/5
低剂量治疗组	+	+	+	++	+	5/5
攻毒对照组	+	+	+++	+++	+	5/5

 

通过攻毒后第 3d 的临床症状和病理变化上分析，预防组鸡只出现病理变化的数量少，且病变程度轻于各给药组和攻毒对照组。

2.2 给药后病变情况

攻毒后第 14d 剖检病理变化（见表 4 、图 1 ）。

表 4 攻毒后第 14d 法氏囊眼观病理变化

	变黄	外部胶冻样渗出液	内部胶冻样渗出液	内部出血点
健康对照组
预防组	+		+
高剂量治疗组	+		+
中剂量治疗组	+		++
低剂量治疗组	+		++
攻毒对照组	++	++	+++	+

2.3 免疫器官指数 [9]

 

脾脏指数、胸腺指数计算方法同法氏囊指数（见表 5 ）。

表 5 各实验组免疫器官指数差异性比较 ( ± S)

组别	法氏囊指数	脾脏指数	胸腺指数
健康对照组	3.5249 ± 0.5638 bb	1.8882 ± 0.2130 bb	3.6525 ± 0.4920
预防组	1.7314 ± 0.3494 aabb	1.9414 ± 0.3258 b	5.6943 ± 0.5923 aabb
高剂量治疗组	1.8041 ± 0.3363 aabb	1.9331 ± 0.2799 b	5.0975 ± 0.5463 aabb
中剂量治疗组	1.7167 ± 0.3650 aabb	1.9053 ± 0.2947 b	4.7064 ± 0.6193 aabb
低剂量治疗组	1.0158 ± 0.1870 aab	1.7850 ± 0.2658 abb	4.4021 ± 0.5689 aabb
攻毒对照组	0.8610 ± 0.2221 aa	2.1376 ± 0.3120 aa	3.7350 ± 0.5369

注 : aa 表示与健康对照组之间比较 P ＜ 0.01, 差异极显著； a 表示与健康对照组之间比较 P ＜ 0.05, 差异显著；

bb 表示与攻毒对照组之间比较 P ＜ 0.01, 差异极显著； b 表示与攻毒对照组之间比较 P ＜ 0.05, 差异显著。

法氏囊指数 , 中剂量治疗组与低剂量治疗组之间比较 P ＜ 0.01 ，差异极显著；高剂量治疗组与中剂量治疗组之间比较 P ＞ 0.05 ，无显著性差异；预防组与高剂量治疗组之间比较 P ＞ 0.05, 无显著性差异。

脾脏指数 , 中剂量治疗组与低剂量治疗组之间比较 P ＜ 0.05 ，差异显著；高剂量治疗组与中剂量治疗组之间比较 P ＞ 0.05 ，无显著性差异；预防组与高剂量治疗组之间比较 P ＞ 0.05 ，无显著性差异。

胸腺指数 , 中剂量治疗组与低剂量治疗组之间比较 P ＜ 0.05 ，差异显著；高剂量治疗组与中剂量治疗组之间比较 P ＜ 0.05 ，差异显著；预防组与高剂量治疗组之间比较 P ＜ 0.01 ，差异极显著。

3 讨论

试验表明，黄芪多糖口服液对 IBDV 强毒株 BC-6/85 攻击鸡具有一定的保护作用，攻毒后预防组鸡只出现病理变化的数量少，且病变程度轻于各给药组和攻毒对照组。表明黄芪多糖口服液可用于传染性法氏囊病的预防。

各给药组均能使攻毒后的法氏囊病变程度减轻，且随着剂量的升高法氏囊出现病变的鸡只数减少。表明黄芪多糖口服液可用于传染性法氏囊病的临床治疗。

此病毒的主要感染器官是法氏囊，因此法氏囊的病变具有代表性，病变的程度也易掌握 [10] 。从法氏囊指数上分析，各给药组与攻毒对照组比较，均能显著提高其法氏囊指数，高、中剂量治疗组效果极显著，而中剂量治疗组与高剂量治疗组比较，无显著性差异。建议在治疗传染性法氏囊病时，使用中浓度 0.67 ‰（ V/V ）的黄芪多糖口服液。

从脾脏指数上分析 , 攻毒对照组的脾脏指数极显著高于健康对照组，攻毒后法氏囊出现明显的肿大；而预防组和各给药组明显改善了攻毒后脾脏肿大的现象，使脾脏指数与攻毒对照组比较有显著的差异。

本实验证明，黄芪多糖能提高鸡的免疫功能，对传染性法氏囊病的防治有积极的意义，这与文献报道 [11 、 12 、 13] 的黄芪多糖具有抗病毒和提高机体免疫功能的作用一致。

4 结论

4.1 通过攻毒后的病理变化、病变发生率和临床症状上分析，可以证实本试验人工感染传染性法氏囊病的病理模型制造成功。

4.2 0.67 ‰（ V/V ）黄芪多糖口服液通过饮水给药，对 IBDV 强毒株 BC-6/85 攻击具有保护作用，其可极显著提高其法氏囊指数和胸腺指数，可用于传染性法氏囊病的预防。

4.3 0.33 ‰（ V/V ）、 0.67 ‰（ V/V ）、 1.33 ‰（ V/V ） 3 种不同浓度的黄芪多糖口服液经饮水给药，可有效治疗人工感染性传染性法氏囊病。各给药组与攻毒对照组比较，均能显著提高其法氏囊指数，高、中剂量治疗组效果极显著，而中剂量治疗组与高剂量治疗组比较，无显著性差异。推荐黄芪多糖口服液治疗传染性法氏囊病的剂量为 0.67 ‰（ V/V ），以饮水给药，连续服用 5d 。

 

主要参考文献

1 ．殷震 , 刘景华主编．动物病毒学 [M] ．北京：科学出版社， 1997

2 ． B.W. 卡尔尼克 [ 美 ] ．禽病学 [M] ．北京：中国农业出版社， 1999

3．高崧,刘秀梵,崔治中.传染性法氏囊病的研究进展,动物医学进展[J],2001,22(3):44-49

4. Hassan M K,Nielsen C K,Ward L A,et al.Antienicity, pathogenicity,and immunogenicity ofsmall and large plaque infectious bursl disease virus clones[J].Avian Dis.1996,40:832-836

5．马增军,芮萍,李佩国等.鸡传染性法氏囊病病毒地方流行毒株的免疫原性[J].中国兽医学报,2007,27 (2):164-167

6．李建荣,周继勇.传染性法氏囊病病毒变异株弱毒的免疫原性研究[J].中国预防兽医学报,2000,22 (5):347-35

7．宋立芹,蒋桃珍,陈光华等.鸡传染性法氏囊病免疫复合物疫苗的安全性和免疫效力试验[J].中国兽药杂志,2004,38 (7):9-11

8．程太平,蒋桃珍,胡建兵,荣俊. 传染性法氏囊病免疫保护试验中3种评定指标的比较[J].中国兽医学报,2007,27 (3):307-310

9．蒋桃珍,董琳琳,陈光华等. 三种鸡传染性法氏囊病活疫苗效力的比较研究[J].中国兽药杂志,2001,35 (1):6-8

10． 尹训南 , 司昌德 , 王笑梅 , 刘洪． IBDV 地方毒株毒力测定的病理组织学检验标准探讨 [J].中国畜禽传染病,1997,(2):52-54

11． 余建国 , 朱楼英．黄芪多糖增强雏鸡对传染性法氏囊病抵抗力的研究 [J].中兽医医药杂志,2000, (6):3-4

12．金光明, 林小东 , 郑昌才．黄芪多糖对雏鸡传染性法氏囊病预防效果的观察 [J].安徽技术师范学院学报,2005,19(1):1-4

13．金凤,那仁巴图,王卫华等. 黄芪多糖冲剂治疗鸡法氏囊病的临床试验[J].养殖与饲料，2007,(9):32-33

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